O diamino fluoreto de prata (DFP) é efetivo no controle da progressão da cárie em dentina. No entanto, seu mecanismo de ação ainda não está totalmente elucidado, sobretudo quanto à contribuição relativa dos íons prata (Ag) e fluoreto (F) na interação com a dentina e na modulação da atividade cariogênica do biofilme. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a contribuição relativa dos íons prata e fluoreto, isoladamente ou em combinação, para a eficácia do DFP na reatividade com a dentina e no controle da desmineralização. Foram conduzidos dois experimentos. No experimento 1, foi avaliada a reatividade da dentina com as seguintes soluções de tratamento (n=10/grupo): (I) DFP (Saforide®; 44.800 ppm F e 253.870 ppm Ag); (II) F (44.800 ppm F – controle de F); (III) Ag (253.870 ppm Ag – controle de Ag); e (IV) Ag+F (44.800 ppm F e 253.870 ppm Ag). Blocos de dentina radicular bovina hígidos, selecionados pela dureza de superfície, foram seccionados ao meio; cada hemibloco recebeu um dos tratamentos por 1 min, sendo o outro hemibloco utilizado como baseline. A concentração de fluoreto fracamente (tipo “CaF₂”) e firmemente ligado (FAp) foi determinada nos blocos. O experimento 2 utilizou o modelo de biofilme cariogênico com Streptococcus mutans UA 159 cultivado por 120 h. Blocos de dentina radicular bovina hígidos, também selecionados pela dureza de superfície, foram distribuídos entre 5 grupos de tratamentos (n=4/grupo): (A) Controle negativo (NaCl 0,9%); (B) DFP (Saforide® diluído 3x - 14.933 ppm F e 84.623 ppm Ag); (C) Ag (84.623 ppm Ag), (D) F (14.933 ppm F) e (E) Ag+F (14.933 ppm F e 84.623 ppm Ag). Os blocos dentais foram tratados com as respectivas soluções por 1 min, uma única vez antes do início da formação do biofilme; uma gota da solução foi aplicada sobre o bloco e distribuída uniformemente. Em seguida, os blocos foram imersos em saliva humana por 30 min para formação da película adquirida e depois, foram posicionados verticalmente em meio de cultura ultrafiltrado contendo inóculo de S. mutans UA159 por 120 h. Para simular os desafios cariogênicos, o biofilme foi exposto à solução de sacarose 10% por 3 min, oito vezes ao dia. Os blocos de dentina, o biofilme formado e o meio de cultura foram coletados para análise. No experimento 1, a concentração de “CaF₂” e FAp foi significativamente maior no grupo F em comparação ao DFP e Ag+F. No experimento 2, os grupos DFP, Ag e Ag+F apresentaram valores significativamente menores de desmineralização da dentina, liberação de cálcio para o meio, acidogenicidade do biofilme e produção de polissacarídeos insolúveis, em comparação ao grupo F e ao controle negativo. A formação de produtos fluoretados na superfície dentinária foi influenciada pela composição das soluções aplicadas. A prata contribuiu significativamente para a prevenção da desmineralização da dentina e para a redução da atividade cariogênica do biofilme, tanto isoladamente quanto em combinação com o fluoreto.